Методы обнаружения бледной трепонемы. Наилучшим способом обнаружения бледных трепонем является метод исследования в темном поле микроскопа, что позволяет наблюдать трепонему в живом состоянии со всеми особенностями ее строения и движения.
Материал для исследования берут в основном с поверхности твердого шанкра и эрозивных папул. Предварительно их необходимо очистить с помощью примочек из изотонического раствора натрия хлорида от различных загрязнений и применявшихся ранее наружных лекарственных средств. Перед взятием материала поверхность твердого шанкра (или другого сифилида) просушивают марлей, затем инфильтрат захватывают двумя пальцами левой руки (в резиновой перчатке) и слегка сдавливают с боков, а эрозия осторожно поглаживается платиновой петлей или ватно-марлевым тампоном до появления тканевой жидкости (без крови). Каплю полученной жидкости переносят петлей на тонкое, предварительно обезжиренное смесью спирта с эфиром предметное стекло, смешивают с таким же количеством изотонического раствора натрия хлорида и покрывают тонким покровным стеклом.
Приготовленный препарат с живыми трепонемами микроскопируют в темном поле. Для его получения необходимо конденсор в микроскопе заменить на специальный, так называемый параболоид-конденсор, и на его верхнюю линзу (под предметное стекло) нанести каплю кедрового масла или дистиллированной воды. При отсутствии параболоид-конденсора можно использовать обычный конденсор, если на верхнюю поверхность его нижней линзы прикрепить кружок плотной черной бумаги с таким расчетом, чтобы по краю линзы оставался просвет в 2–3 мм. Для предупреждения смещения кружка следует при его вырезании оставить 4 выступа, которые упирались бы в металлическую оправу линзы.
Микроскопирование в темном поле зрения. Бледная трепонема выглядит очень нежной и подвижной, слабо светящейся серебристым блеском спирально или пунктиром из-за более яркого освещения выпуклой части завитков. Она обладает активными движениями четырех видов:
1) сгибательное, при котором она раскачивается наподобие маятника;
2) ротаторное вокруг продольной оси;
3) поступательное, при котором чередуется то быстрое, то медленное движение вперед;
4) контрактильное – волнообразное движение всего тела трепонемы.
При отрицательных результатах исследования на подозрительную эрозию рекомендуется наложить на 24 или 48 ч часто меняемую повязку с изотоническим раствором натрия хлорида для очищения язвы или эрозии от вторичной флоры, после чего исследование проводят повторно. При многократных повторных отрицательных результатах исследуют пунктат из увеличенных лимфатических узлов.
Серологическая диагностика сифилиса. Серологические реакции являются важнейшим вспомогательным методом для распознавания сифилиса. С их помощью устанавливается эффективность лечения, прогнозируется течение заболевания, решаются вопросы о завершении лечения и наблюдения за больными.
Степень выраженности серологических реакций обозначается крестами: резко положительная 4+, положительная 3+, слабоположительная 2+ или 1+ и отрицательная –. Кроме качественной оценки, используется и количественная постановка реакций с различными разведениями сыворотки (от 1:10 до 1:320 и выше).
В настоящее время в состав комплекса серологических реакций (КСР) для диагностики сифилиса входят:
1) реакция связывания комплемента (РСК) с трепонемным и кардиолипиновым антигенами;
2) микрореакция преципитации (МРП);
3) реакция иммобилизации бледных трепонем (РИТ, пробирочная и меланжерная);
4) реакция иммунофлюоресценции (РИФ) в модификациях: РИФ с абсорбцией – РИФ-абс.; с сывороткой крови и капиллярной кровью; РИФ-200; РИФ с цельной спинномозговой жидкостью – РИФ-ц. (качественные постановки).
МРП проводится как в серологических лабораториях (так как входит в комплекс КСР), так и отдельно в клинико-диагностических лабораториях для более широкого охвата населения. МРП обследуются лица, подлежащие периодическим медицинским осмотрам на венерические заболевания. МРП является отборочным, а не диагностическим тестом; если она положительна, то диагноз сифилиса не устанавливается, а обследуемого направляют к дерматовенерологу, который должен подвергнуть его клиническому обследованию и организовать исследование крови на КСР.
КСР применяется для диагностики всех форм сифилиса, контроля за эффективностью лечения, обследования лиц, бывших в половом контакте с больными сифилисом, лиц с клиническим и анамнестическим подозрением на сифилис, больных психиатрических и неврологических стационаров, доноров и беременных, включая лиц, направленных на искусственное прерывание беременности.
РСК на холоде применяется в случае получения отрицательного анализа при использовании термостатного метода для диагностики всех форм сифилиса.
РИТ целесообразно ставить в случаях положительных стандартных серологических реакций на сифилис у лиц без клинических и анамнестических признаков сифилиса. РИТ считается положительной при иммобилизации от 51 до 100% трепонем, слабоположительной – от 31 до 51%, сомнительной – от 21 до 30%, отрицательной – от 0 до 20%.
РИТ и РИФ необходимы для диагностики скрытых и поздних форм сифилиса; для распознавания ложноположительных результатов КСР и МР, особенно у беременных и соматических больных; при клиническом и эпидемиологическом подозрении на сифилис, а также для установления излеченности сифилиса.
РИФ-абс. рекомендуется применять при обследовании лиц, имевших половые контакты с больными сифилисом, так как она становится положительной раньше других реакций. РИФ-абс. целесообразна при формах сифилиса, сопровождающихся малой концентрацией в крови противотрепонемных антител.
Техника взятия крови для серологических реакций. Кровь для исследования на РСК, РИФ и РИТ берут из локтевой вены натощак шприцем или одной иглой (самотеком). Шприц и игла должны быть после стерилизации промыты изотоническим раствором натрия хлорида (нельзя промывать водой, спиртом, кислотами, щелочами). В чистую сухую пробирку забирают 5–7 мл крови.
Кровь для исследования экспресс-методом берут из пальца или из локтевой вены.
При необходимости для исследования в отдаленных лабораториях можно вместо крови пересылать сухие сыворотки. Для этого на следующий день после взятия крови сыворотку отделяют от сгустка. Затем набирают 1 мл сыворотки в шприц и выливают ее в виде двух отдельных кружков на полоску писчей бумаги, вощаной бумаги или целлофана размером 6.